第六章 根和根际的植物营养研究
根系研究的基本方法和根际研究的 几种方法的原理、原则 具体步骤
各种方法的优缺点。
根系几根系的研究方法
根系的概念：根系是作为固定植物体，摄取、运输和贮存营养物质，以及合成一系列有机化合物（从主要的贮藏产物和可溶性代谢物到生长调节物质）的器官，是植物的地下生长部分。根系的研究具有重要意义，主要与以下问题密切相关：植物的生态适应性，水分和养分资源的获得，土壤微生物，资源的分配与菌根的作用，植物间的相互作用，土壤结构的形成，固定和铆固作用，根的产物（根分泌物、根际碳的积累），根系生物学方面等。
植物的根系有直根系和须根系1）直根系 植物的根系由一明显的主根(由胚根形成)和各级侧根组成。大部分双子叶植物都具有直根系,如陆地棉(Gossypium hiasutum L.)、大豆(Glycine max (L.) Merr.) 等。大多乔林,灌木以及某些草本植物，例如雪松、石榴、蚕豆、蒲公英、蒲公英,甜菜,胡萝卜,萝卜等植物的根系是直根系. 直根系的特点是主根明显,从主根上生出侧根,主次分明。从外观上，主根发育强盛，在粗度与长度方面极易与侧根区别。2）须根系 植物的须根系由许多粗细详尽的不定根(由胚轴和下部的境界所产生的根)组成。在根系中不能明显地区分出主根(这是由于胚根形成主根生长一段时间后,停止生长或生长缓慢造成的)。大部分单子叶植物都为须根系。如高粱(Sorghum vulgare Pers.)、香附子(Cyperus rotundus L.)等。禾本科植物如稻、麦、各种杂草、苜蓿以及葱、蒜、百合、玉米、水仙等的根系都是须根系. 须根系的特点是种子萌发时所发生的主根很早退化,而由茎基部长出丛生须状的根,这些根不是来自老根,而是来自茎的基部,是后来产生的,称为不定根(adventitious roots）。 几种常用的根系研究方法
对植物根系的研究比对植物地上部分的研究要困难得多。因为植物根系生长在土壤和其他介质之中，使得对根系的观察和取样的难度大大高于植物地上部，往往是相当费时而且费力。但是，研究根系在不同土壤、不同生态条件下发育和分布的规律对根系生理、生态研究至关重要，尤其是在应用生物学领域内，如农业、园艺以及森林等研究中。
在现有基础上对根系研究进行唯一的分类（不包括根系生理学的研究方法）是不可能的，因为许多方法虽具有相似的特征，但原理不同。所以对其进行的分类常常因人而异。最简单的分类法可以是旧或新，直接的或间接的，田间法或容器法等等。也有按照具体方法进行分类的，如原状土法、玻璃管法等。对适宜方法的选择将取决于研究目的，因为没有任何一种方法能够回答所有的问题，常常是需要明智地选择多种方法同时应用。人们在采用一种方法时也经常对原有方法加以改进或创造出更好的方法来。通常是方法越精确，越费时费力。因此，实验者也必须根据自己的实际情况加以选择。
下面介绍的是几种具体的方法，有关根的一些参数，如根长、根密度、根重等的测定也将进行分别介绍。
（一）钉板法 钉板法被许多根系研究学家普遍采用，它把对根的图像描
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述和定量测量结合起来。这种方法在野外，利用一块特制的钉板，可以把原状土及其中代表性的根系样本采集上来。当用浸泡或冲洗的方法去除土壤后，板上装置的针或铁钉可以把根系保持在其自然位置上。然后，就可以对清洗后的根系进行研究、摄影或绘图，整个或分部位进行测量。小型的整段标本可利用简单工具采集，大型的整段标本则必须借助于动力机械操作。
1.钉板的制作 木板的规格和钉的长度一般视所取根系样本的大小，也取决于研究的目的、设备条件和人力。采集小型整段标本的木板可采用50cm*50cm，钉长5cm，对于较大的样本，规格可以增大到木板60cm*100cm，钉长20cm。选择好适当规格的木板后，将木板钻孔，孔径略小于所用钉的直径。钻孔的行距和列距对于成熟作物来说以5cm较适宜，对于苗期根系研究的小型钉板
（20cm*30cm）则为2cm。然后，在每个钻孔，把u型弯钉或金属丝压进去，用另一块薄板（1cm）从后面与厚板合起来，以固定钉入的钉子。
一般认为5cm的孔距在许多情况下较为适宜。如孔距太近，当遇到硬土层的情况时，清洗根系比较麻烦；而当孔距太大，会导致许多根离开了它们的原位，再摄影或所绘的图像不能十分逼真。当然，对于苗期植物或坚硬的树木根系，孔距可以适当相应地缩小或扩大。
钉板可以漆成黑色，这样可以为拍摄根系提供具有反差的背景，钉子也可以上漆以防止根系被锈污染。用黑色塑料压入钉板能够取代上漆，这种途径还有一个优越性，即清洗完根系后，可以连同塑料膜把整个根系从板上取下来。进一步的改进方法是在钉板上复上一层尼龙网或金属布，那么在洗根的过程中可以把尼龙网或金属布适当提起来，使水或能从网下漏掉，借此可以把泥土摩擦降低到最低限度。
2 取样 在野外，首先按土壤整段标本取样方法，通常需要挖掘至少是1m见方的原状土，断面与植物茎的距离应该是保证根轴位于土段的中部，断面光滑，垂直于地面。断面准备就绪后，把钉板对着断面，钉板的两侧及底部则借助于铲、刀或钢板等切断。钢板也能起到支持土段的作用，尤其是对于沙土或结构较松的土壤说尤其重要。
3 清洗 对于野外采集的大样本，如果土段土质为砂土或壤土，可以把它直接浸入水池中直到土壤水分饱和，大约需要12h左右。浸泡过程中不要取下支，撑土段的框架，以免造成土段的断裂。然后提起钉板，使土段面高于水面2-3cm，稍微倾斜，使泥和水流失，并保持压力低的水流自下而上冲洗根土分离，即可在钉板上留下整个根系原始分布情况。
当土壤中粘粒的含量较高时，跟的冲洗十分困难而且造成大量根的损失。为了加速清洗过程及减少根的损失，可采用如下两种途经：1）把整个土段置于100℃的温度下干燥后，浸入焦磷酸钠溶液，然后依前法冲洗；2）土壤以水饱和，在-25℃的低温下冷冻，然后冲洗。这种冷冻---冲洗过程可能需要反复多次。对于易受冻害的植物，这种冷冻方法需要谨慎使用。
4 根系摄影及测定： 冲洗好的根系，略为晾干后不必取下钉板就可以在黑色背景上直接拍照最好是把钉板置于有薄水层的盘中，则大小根系可在水中自然伸展，摄影效果更佳。也可以先制成干根标本后再进行拍摄，虽然这没有水中的情况那么真实，但用于示范，展览等目的来说是可行的。干根标本可以测定其长度和分布形态，也可用于干物重测定和分部位测定其重量和体积。
（二） 容器法 容器种植通常可以用来研究根系的生理或生态学特征，它能够控制在田间条件影响根系生长的许多环境因子的交互影响。在实验处理中，采用
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不同组合的环境因子，可以获得根系生长中单因子的主效应以及多因子间的互作效应等大量信息。
容器法的主要优点是比田间情况易于掌握和研究，而且其生长条件可以相对一致多次重复。其不足之处是，该法是在非自然的条件下进行的，采用的是经过处理的土壤或其他介质，没有其他作物根系的竞争，存在或缺少某些特殊的土壤生物体，不能完全模拟田间的真实情况。
1 根的生长体积和容器大小：容器的大小和形状为根系的生长体积提供了有限的空间，对于具有庞大根系的作物来说是一个很严重的问题，所以容器的种植常常仅用于苗期或是根系较小的作物。当研究较大的作物的根系时，根系的自然状况及研究目的决定容器应该有怎么样的大小以满足作物根系的生长。许多研究者建议，容器应该有足够的深度，这是因为根系一旦在水平方向发展受阻，就有转而垂直向下的特征。此即为许多种植容器直径较小，而高度却很可观的原因。
2 种植盒的制作：用于进行植物根系研究的种植容器有不同的种类。普通花盆，来切里希盆及各种圆的或方的塑料盆为最为简单的容器，小型的透明容器也可以放在大些的不透明容器中，待需要观察根系生长的则把它取出。这种研究与一般温室培养试验一样，相对来说比较简便，能够很快地得到信息。但是，盆钵越小，种植时间越长，其结果的实用性就越受到限制。
对于比较大的根系生态研究来说，需要不同设计的大的种植盒或种植筒。一些早期的种植盒长*宽*高的尺寸达到30*30*100（cm）圆筒容器比种植盒更为普遍，有铁制的、铝制的陶瓷的、陶土的等等。近年来，塑料圆筒的应用较为成功。在填土之前，这些圆筒的底土被封上尼龙或金属网，它们常常被置于有稳定水位的浅水槽上。
利用种植盒或种植箱，常常存在着控温的问题，根系生长对温度很敏感，而温室温度常常与大田差别很大，因此许多研究者把容器埋入地下，使其接近自然。一些土壤中的永久性的水泥种植盒也被采用以克服温度的问题。
许多种植箱为了能够对根系的生长发育进行连续地原位观察采用了玻璃面，其余部分由木头或金属制成，玻璃面是可以移动的，外面可以覆盖一块不透明层，如铝箱等，防止根系被阳光照射。按常规进行播种及管理。也可以将容器埋入砂中或土壤中，使种植盒高出地面1-2cm。玻璃面的种植盒具有许许多多不同的类型，有三角棱柱型的、三面都有玻璃，有搁置的安装在手推车上的根系研究盒，两面均有玻璃；还有温室内永久性的、立地的种植特制的安装在手推车上的根系研究盒，前面有垂直的玻璃板，用于一些特殊的根系研究。玻璃面种植盒法不仅有利于根系生长过程中的观察，而且也可以方便地域钉板法结合起来，达到根系样本的采集，拍摄，定量研究等目的，一举数得。 （三）玻璃壁和玻璃管法 除玻璃面种植盒外，从玻璃后直接观察根系生长的还有玻璃壁和玻璃管法。在玻璃壁法中，作物的根系生长是通过安置在土壤剖面上的玻璃窗口来进行观察的，这样可以在自然状态的环境中进行根系的研究。这种原位连续观察和记录的方法导致了简单的根系观察室以及现代化地下根系实验室的建立，通过这些设施得到的结果加速了田间根系研究的进展。
在玻璃壁方法中，玻璃必须与土壤紧密联接，中间不留空隙，否则，根系生长的环境条件可能会有很大的改变，而且泥土和水会充斥空间，影响观察的清晰度。玻璃管法也是用来对根系生长进行连续观察的，比起玻璃壁来，其成本低，简单方便，对土壤的损害小，而且可以用许多支玻璃管进行观察，从统计的角度来说也有大裨益。管的长度和直径依试验观察要求而定，选用50-120cm长，直
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径6-7cm的透明玻璃，外壁用防水记号笔或砖石笔画出5*5（cm）的方格，底部用木塞或橡皮塞塞紧。玻璃管可以埋入田间、温室的生长箱或其他种植容器中，与平面垂直或成一定的角度。在田间要先用直径稍大于玻璃外径的钻筒在所需观察地点钻孔，然后把玻璃管插入，在空隙处填以采自高地的、筛过的干燥土壤。玻璃管高于地面10-15cm，露出部分可用不透明纸包裹或漆成深色，管口用铝箱封口或罩以金属罐。用直径小于玻璃管内劲的圆形小镜固定在一条金属杆的一端，使其能在管内自由移动，或停在某处，在小镜上方有两个连接2节6v电池的6v灯泡安在金属杆撒花上作为观察的光源。
当要观察根系生长情况时，把观察镜盒光源引入埋好的玻璃管内，外边套以内经稍大于玻璃管外径的长30-50cm的不透明套管，套管的上端装有4倍放大镜，这样就组成了观察系统。在不搅动生长基质的条件下可以定期地观察根系沿玻璃管外壁撒和那个的生长状况。
如果需要在很深奥的土层中观察根系，则光源强度和放大镜倍数要相应增大，观察套管高度也同样加大。不断改进的较先进的观察仪器以及应用内窥镜与电视显像管连接，更便于对根系的生长发育动态进行观察。玻璃管法和玻璃壁法存在一个共同的问题是管或壁厚很近的距离会产生根的密集。有报道说，玻璃管厚2mm的土壤层内根密度是周围土壤的3陪。但在自然土壤剖面观察根系的角度看，任不失为一种好的方法。
（四）根系研究的同位素测定法 50年代以来，同位素在根系研究上应用日渐引起重视，对推动根系研究起了一定的促进作用。采用同位素示踪以前，研究植物根系的方法主要是目测培养箱中根系的生长和分布，或把根系从土壤中分离出来进行研究，不能反映根系的吸收能力。同位素示踪法在自然土壤剖面测定植物根系的生长和活力是50年代由Lott及其合作者开始的，目前已被广泛应用。同位素示踪技术提供了原则上全新的直接的测定方法，而且不需要进行根系与土壤的分离，对研究根系吸收养分的活力、吸收部位及转移的速率等有着独特的优点。
1 土壤注入法 即在土壤的不同位置、深度注入放射性物质32P或86Rb，经过一段时间后测定地上部部分的放射性强度，其结果直接反映出植物根系的吸收能力大小，也即根系的活力。根系活力是一个相对的概念，因为不同作物种类、根系的不同部位、根系的分布密度、生理年龄、土壤水分、理化性状等都会对根系活力产生影响。一般采用的方法是测定单位根重在单位时间内吸收的示踪剂量。
磷是最常用的示踪元素，而且最适合该项技术的基本磷是最常用的示踪元素，而且最适合该项技术的基本假设，即根系接触不同位置注入的示踪剂机会均等，示踪物在土壤中保持位置不变并始终对作物吸收有效，以及注入示踪物的比活度在土壤中是接近均衡的等等。具体方法是在植株周围选择距根茎不同距离或不同深度处钻孔，注人示踪物后，填上孔穴。操作时，要注意不要使示踪物污染植株，造成误差。一般经过一周左右的时间，收获地上部分，制成样品，就可以测定。
2 植物注入法 这种方法是在植物地上部茎的基部注人32P或其他示踪物，经过一定时间从根系分布区的一定部位取原状土样品，样品中的放射性强度可以反映该部分土壤活性根的数量，从而判断根系的含量及根系的分布情况。 一般的操作步骤是：选择禾谷类作物，用校难的两支微量注射器之一注人植物的第一和第二节间部位，创造吸力，保证示踪物质进入植物，用另一支注射器注入一定量的32P。用火棉胶封住针孔。需要经过5h到5天，32 P示踪物在植物体内平
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衡分布以后，采集原状土样本。平衡的速度快慢取决于作物的生长期，受放射强度的影响很大，不同的作物间差异也很大。土壤样本用圆筒取样器在植抹周围不同距离、不同深度处取出。将样本风干、磨细，在 500℃温度下灰化，以使根系中的32P与土壤充分棍匀。取其中部分样品用G-M计数管测定放射性强度。通过计算该部分土壤体积所含放射性强度占全层土壤的百分比，可以直接测定相对根量，以此可对根系的生长情况进行推断。
但是，这种方法并不是在任何时间都能显示根系从土壤中吸收养分的能力。例如，在土壤水分亏缺的情况下，示踪物仍然能被向下输送到活的、然而休眠的根系中去，而这部分根系由于水分缺少而无法吸收养分。
3 宏观放射自显影法 利用放射性自显影法可以测定根系的分布，获得直观的根系分布材料。首先必须制备根箱，大小可按试验要求而定，如内部容积可为40㎝×25㎝×90㎝。除一面装有透明的有机玻璃板外，其余各面用胶木板制成。有机玻璃扳一面供观察用，在其外再覆以可移动的胶木板，使根系不致长时间暴露于光照。根箱向装有机玻璃面倾斜45°，以促进根系沿玻璃扳面伸长，便于进行观察。通过植株地上部分注入32P，经3—5天后，可用X光胶片对根箱有机玻璃板一面按接触法进行曝光、显影、定影等制备宏观的根系分布图。
(五)多孔膜—根栽培技术 高产植物需要生长在适宜的、无生理胁迫的环境条件之下。整个植物的生命活动是与根系活动紧密联系在一起的。在人工控制的根系研究室里，植物对控制下的特定的环境条件做出反应，已经取得了一些有价值的资料，但这些结果并不能完全符合田间环境的真实情况，具有一定的局限性，并容易造成根的损失，特别是具有吸收活力的纫根部分的损失。运用多孔膜把植物根系从自然土壤中隔离开来，只容许其中的水分、养分通过的方法最早是在1951年由Brown和Albrecht建立的，但以往大多是用于短期试验。1984年，Brown和他的合作者介绍了一种用于田间土壤条件栽培植物的多孔膜—根栽培技术。该法是让植物全部根系限于田间一个横埋于土壤表层中的多孔膜套内生长。膜套口开在地面上，幼苗从开口处移栽到膜套中，养分、水和氧气通过多孔膜进入到膜套中。在不同的生长阶段可分别收获包括无土根系在内的全部植株，然后按照试验目的进行必要的分析测定。
具体做法是：用以丙烯酸包被的尼龙纤维多孔膜(孔径0.3m)做成长约2m，宽0.35m的多孔膜套，其边、底以胶合剂粘接，再用胶带加固。将膜套水平埋于20㎝深的表层土中，口开在地面上，以便将植物幼苗移栽到膜套中。幼苗在塑料盆钵中生长一定时间(如4周)后，将盆底去除，连同幼苗一起移栽到膜套的开口内，用胶带将套口粘贴到盆边上，高出地面7㎝左右。根系被限于膜套内生长，通过多孔膜获得养分、水分和氧气。为了保证根系移栽后的正常生长，在移栽后10天左右，可向膜套内提供一种定量配制的营养液(如Hoagland营养液)。
多孔膜套的上下土壤中按试验要求进行施肥，周围有灌溉系统，维持土壤中一定的水分状况(如基质势大于或等于-0.3MPa)。膜套周围土壤按常规进行栽种，作为对照，以便与膜套内植物的产量和化学分析结果进行对照。在预先设定的不同生长阶段进行收获。取出膜套，用去离子水清洗后，取出根系，移去根茎外塑料盆，用去离子水冲洗根茎，这样，整株植株便可用来进行各种测定。在膜套上方和下方0.5M处取土样，按需要进行各种理化分析。多孔膜—根栽培技术的应用，能够在一定的生长期内提供完整的植物根系及其地上部，为正确评价土壤中物理、化学、生物环境的影响，如土壤酸度、紧实度、水分和养分以及植株密度、生物固氮等，提供了一个良好的研究手段。
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(六) 根的参数及其测定方法 描述根系生长和分布的参数通常有根重、根数、根表面积、根体积、根径、根长及根毛数量等等。在试验布置以荫就要考虑以哪种方式来对根系生长进行描述，从而选用相应的试验方法。
在决定选用某种根系参数时，不仅仅要考虑研究目的的需要，同样要考虑到时间和物力。比如，在许多实验中，根系生态学家希望了解根系的表面积，但是没有迅速、可靠的常规方法，只得用其他参数取代之。由于在进行根参数的测定时，同一试验结果往往相差很大，为了更好地解释根系数据，最好能测定多个不同参数进行比较。下面介绍几种根系参数的测定方法。
1 根数 根计数在许多根系研究方法(如玻璃壁法)中都是常用的手段。测定不同层次的根数能够对一个剖面中根的密度有良好的了解。
在研究一株植物完整无损的根系时，从主根和侧根数能够估计出根的总长。尽管根数并非一个理想的参数，因为长根和短根都只能作为共同的单位，但是还是有可能与其他根系参数取得很好的相关性。
2 根重 根重对于表征根的总量是一个很好的参数。当需要了解植物地下部分的生产力时，根系的干重就可以作为估计的标准。根重也同样被认为是光合产物在植物体内贮藏的基本特征。所谓根冠关系也主要是基于地上部和根的重量。
但是根重并不能显示出根系的吸收能力的大小，因为在根重中，有些根系的比例只占很小部分，然而它们的吸收能力最强，因此，根重最高的土壤层不一定是对水及养分吸收能力最大的层次。这种情况尤其是发生在具有很粗壮主根的植物品种时，如多年生的木本植物。 根重测定有鲜重和干重两种。
鲜重测定十分简单，洗过的根系用吸水纸吸干，即可称重。其准确程度与根外的水分含量有关，因此，受操作的影响很大。
干重测定较鲜重测定准确得多，因而也更实用。被广泛应用在根系的生态研究上，根系生长及其作用的许多信息都基于根干重。测定过程是：将洗净的根置于105℃的烘箱中10-20h(视根量而定)。烘箱的温度也可以降低到60—70℃，但烘干时间需相应延长。然后称重。
3 根径 了解根径的大小(表6—4)，可能获得关于土壤孔除大小与根系穿透潜力之间关系的信息。在研究一年生植物时，根径在大多数情况下用来计算根表面积或根体积。 测定前，须先将根系浸泡于水中数小时，因为许多根呈没有规律的干燥程度。根径的昼夜变化很大。在干燥、晴朗的天气，根径能够收缩至本身最大值的60％，在测定时需对这些因素加以考虑。
根径的测定是用带有测微计的显微镜直接对鲜根进行测定。对大根来说，可用小的手镜，千分卡尺。如果一条根的直径上下有差别，则可以按一定间距分别测定。
4．根长 近年来，越来越多的根系研究工作者对根长的测定很感兴趣。原因之一就是方法的改进使得测定速度加快。更重要的是，研究者们认为单位体积
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土壤内根长(根密度)是计算根系吸水量的最好参数。根密度对土壤水分、养分的亏缺范围有很大的影响，意味着相邻根系对有效养分的竞争，而且在研究养分吸收过程中，高密度根系通常导致养分更完全的吸收，有助于养分利用率的提高。当然，根密度和养分吸收的关系受根系环境中多种因素的影响，但一般认为，根长的测定比根重及其他根系参数更为有用。根长测定在不同的生态研究中校广泛应用，这里仅介绍根长测定的几种方法。
(1)直接法 将湿根置于有浅水层的平底玻璃盘中，盘上铺有带毫米(㎜)刻度的方格纸。用镊子把根拉直，尽量不使它们相互重叠，并用一块玻璃板压着防止移动。根或根段的长度随后就能以肉眼或手镜在最近的刻度处估计。
另一种方法是整齐地把根的两端用胶水固定在毫米方格纸上，有分技的根则裁成单独的根段再同样处理。
用这种直接法进行根长测定是繁杂、费时的，一般不作为常规方法。 (2)直线截获法 即以根系与一定规格的方格纸上纵横线条的裁点数来计算根长的方法，比起直接法可以节省许多时间。用这种方法测定的数据与根系的实际长度具有很好的线性关系，如用直接法和交叉点法测定的实际和估计棉线长度之间的关系达到极显著水平(r＝0.99)。
直接截获法的测定只需准备一个用透明塑料或玻璃制成的浅盘，盘子的大小以30㎝×40cm为好。将一张方格纸置于盘底，湿根和少量水一起倒入盘内。用镊子或针把根在方格纸上分散开，使之不相重叠。计数根与方格上纵横线条的交叉点数，计数点数时可以使用计数器。以使用计数器。
方格的大小视所要测定的根的数量而定。对于总长不足l m的根样本一般用1㎝间距的方格，总长达5m的较大根样本用2㎝间距，对于总长15m的根系则建议用5㎝间距的方格。为保证一定的准确度，防止工作者过于疲劳，交叉点数最好大于50，小于400。根长可以下式计算：
根长＝11/14×交叉点数×方格间距(㎝)
把11/14和方格间距结合起来，就能得到转换因子，对于1，2，5印间距方格来说，转换因子分别为0.786，1.571和3.929，转换因子也可以由交叉点数与实际根长的线性方程得到。
虽然用直接截获法测定根长比直接法能在较短时间内测定出根的长度，测量精度也较高，但还是相当麻烦和费时。往往由于人为因素，误差也较高，而且有的植物根系无法进行人工测量。因此，基于直线截获法原理的根长测定仪器在测试方便、迅速、精度高的测根需求下，20世纪70年代在国外被研制出来。目前测定根系的软件系统有多种，其中加拿大科学家开发的WinRHIZO根系分桥系统已在国际根系研究领城被广泛采用(后详述)；我国近年来研制出了ZG-1植物根系长度测试仪(以下简称测长仪；东南大学制造)。该测长仪应用电子测量技术进行数字显示、自动测试，主要特点为测量时间短、测量精度高、操作简单、工作稳定及显示直观。
基本结构与工作原理：主要由主机活动部件、光电转换装置和光电信号处理器三部分组成。环形透光物盘固定在一微电机轴上，该微电机文座通过丝杆传动与另一微电机轴连接，使物盘既做圆周运动，又做直线平移运动。
物盘下方有一点光源，上方为光电转换装置。光电转换装置由点光源、笔式显微镜和光敏管组成，可以在三维方向上任意调节，以保证显微镑与点光源小孔的中心同心。物盘运动时，光路在物盘上的轨迹(阿基米德螺线)相当于直线截获法的标尺线。物盘上放有根系时，根系与光路相交，类似于根系与标尺线相交。
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通过光电转换装置和电子测量电路可以精确测定根系与标尺线的交点数N，并通过面板的计算器直接显示待测根系长度。
光电信号处理器主要完成微弱电流放大、形成脉冲信号与计数的作用。 调试：把清洗过的干根或湿根剪成2㎝左右的根段。如果待测根系直径较粗，不太密集可选择“干”测，按下电源开关，直接把根段均匀分布到物盘上；按下计数开关，物盘开始转动和平移，当物盘运动至员左或员右端时，限位开关切断微电机电源，计数器显示的读数即为待测根系总长度。
如选择“湿”测，在物盘中要加入少量水，使水均匀布满物盘，均匀撒入根段，用滴管吸走多余的水，其余同“干”测法。
大量的实测表明，与标准长度测量误差一般不超过5％，性能可靠。每次测量仅需6.5min，能够显著降低测试时间。
5 根表面积 根表面积可能是表征根系对水分和养分吸收最好的参数之一，可以用以下两种方法进行测定。
(1)直接法 以直接法测量根表面积是测量出很多根的平均直径、每个样本的总长度，然后根据它们计算出根表面积．同样也可以由直径与体积两项数据计算出来。直接法的缺点是，这种途径只能让人们获得对根表总面积大小的印象，不能反映根系的活力。
(2)吸附法 吸附法通过根系的吸附进行间接的根表面积估计。
有一些研究工作者用的是染料法，即把清洗过的鲜根浸入染色溶液中，测定根系所吸附的溶液；用的较多的染料是亚甲蓝。
其基本步骤是，把洗过的根系样本浸入配制好的亚甲蓝溶液中(0．02—5四儿)，轻微搅动，一定时间后取出。每个根样本所吸附的亚甲蓝量可以从最初和最终染色溶液浓度之差计算出，从而进行根表面积的估计。 为了区分出有活力的和失活的根系，可以在浸入亚甲蓝溶液以后把根样本转到氯化钙溶液中去。在氯化钙溶液中失活根面上吸附的亚甲蓝溶液被钙离子所取代。用这种方式可以对根系的养分和水分吸收活力做大致的估价。 在根系生态学中，区分根系整个表面积和它的活力部分是十分重要的。但是，染色法本身还有不少问题，因为不同品种的作物对染色的反应可能大相径庭，根系对染料的吸附与根系的物理性状及阳离子吸附能力有关。此法所得到的根表面积数据有必要与其他根系参数进行比较。
另一种是滴定法。把洗过、风干的植物根系浸入3mol/L的HCl中5s，排去多余的酸后转到含有250mL蒸馏水的烧杯中，放置10min。然后吸取10ml烧杯中的溶液用0.3mmol/LNaOH滴定。滴定值即NdOH的用量(mL)，作为总的根表面容量，这种方法与染料法一样，只能得到相对根表面积数据，不可能十分精确。
6 根体积 根体积可以由平均根径及根长来计算，但这种方法并不常用。 一般采用排水法测定根体积。用一种特殊带喷口的容器，向容器注水，直到多余的水从喷口里流出为止。将清洗过吸干水的作物根浸入容器中，用量筒测定法测出水的体积，水的体积代表所需测定的鲜根样品体积。
根体积的测定在根系测定中不很普通，主要原因是有些作物品种只有少量大的根系却与有大量小纤维根的品种具有相同的体积。通常，根体积只能作为研究根系的一些其他参数的补充。
7 冠-根关系 作物根及其地上部的相互作用是多方面的，研究这两者之间的关系是根系生态学家的一个重要课题。冠根比(C)是描述这种关系的参数之一，即测定作物地下部与地上部干重的分布。
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但也有不少研究工作者使用其倒数，即根冠比。一般地说，地上部的干重大于地下部，因而冠根比通常大于1。但这种比例并不是很稳定的，生态条件的改变能使田间作物的冠根比发生很大的变化。例如，盐度、干旱和淹水这样的胁迫条件降低了根中细胞分裂素的合成及其向茎部的转移，对茎生长和蛋白质合成产生影响，故调节了地上部生长。又如，在缺磷条件下，冠根比减小等等。
仅仅从冠根比的数据还不能很有效地说明根系对于作物的效率，还应从分析或模拟整体的生长模式和估计生态系统的初始生产力中得到更多的信息。根系在生长早期阶段一般是活跃地积累与地上部相关的干物质，随着季节的推移，积累干物质的速率减慢。
更重要的是，当考虑根系对作物生长的效率时，根在土壤层中的分布是比根重更为关键的因子，如旱地作物的抗旱性能取决于是否有—个分枝很多的深根系统。有试验指出，作物地上部的生长与位于30㎝以下的根系生长有显著的相关性。因而，研究作物地上部与根系的关系时绝不应仅仅局限于干物重的比扔，比如可以找出根系长度与地上部发育阶段的关系等。
此外，对于所有能够控制作物冠-根关系的生态因子研究来说，必须与控制作物生育的激素机制的生理学研究密切地结合。20世纪70年代以来，根系生理学家已经发现作物地上部和根系生长之间存在显著的激素反馈机制。
(七)根系研究室 根系研究室是在玻璃壁法的基础上发展起来的。单独介绍根系研究室是因为它集中了许多研究手段，已经或将是现代化的进行根系观察和研究的场所。
1 设计特征 根系研究室一般有地下通道，每边都有透明的窗口，植物的地上部分则暴露在田间生长环境下。最早的根系研究室是1900-1905年在德国建成的。早期研究室规模较小，大部分采用经人工处理的土镶，有4—6个观察室。分别于1961年和1966年在英国东茂林(East Malling)试验站建成的两座光型(phototype)现代根系研究室，对于现代根系研究产生了很大的影响。尽管随后在不同国家建立了相似的研究室，但按照研究目的的需要，有的玻璃窗口后是自然原状土，有些则是人工处理的土壤。
但对自然的、未经搅动土壤的玻璃壁根系的观察仍以英国东茂林试验站的为最好。这两座根系研究室结构相似，地下通道长30m，宽2.1m，高2.1m。地下通道两边有48个窗口，每边24个。窗口的高和宽分别为122㎝和102㎝。
下边是低水泥墙，上面为可以调节的钢架。在安装窗框以前，首先记录地下通道两边剖面情况，随后把壁上的土壤从安窗处取下2-3㎝厚。将土样按层次分装在盒子里，风干后依同样的次序再填于安好的窗口后，这样就可以得到没有孔隙，清晰平滑的观察表面。窗户几乎是与地面垂直的，仅有2.5㎝向前的倾斜。
屋顶的边缘距地面只有25㎝高，以减少微环境改变对所研究植物的影响。里边装有电光源及6个小型遮光排气风扇。玻璃面厚6.4㎜，刻有1.3㎝×1.3㎝的方格，以便确定根系位置和绘图。1966年后建立的实验室里也有些窗面不是整块玻璃板而是由许多小的可移动玻璃板组成的，小的玻璃板较不易破碎，所有这些窗口都用遮光的百叶窗覆盖着。为了获得玻璃后环境条件的变化信息，在玻璃后面土壤的不同层次、距离处安装了一些测定仪器，如测温计、水分负压计、中子探测器等。
后来不断涌现出来的根系研究室，常常按实际情况作改进。例如，改高进口为低平进口，如1975年美国爱荷华爱玛的根系研究室就安装在露天地下。为了对土壤中水分、养分、农药等的移动有更多的了解，许多根系观察室与渗漏计结
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合起来的研究设施也逐渐建立起来。在这些根系观察室的底部装有过滤板和水溶液取样设备，以进行土壕中离子运动的评价。
2 记录方法 对根系的观察包括对根的分枝、根色、根的生长方向等的定性方法。基于频率的直接观察，可以获得半定量的根密度数据。
可以把根系绘制在方格纸上进行定量测定，还可以在玻璃上覆盖透明金属箔片，用防水笔把根系描下来。描制完后，用计图器在箔片上测定根长。
用迅速的方法还是以直线截获法为好，玻璃上已经具有现成的方格系统，只需在原地计数根系与方格系统的交点数，就可依前述公式计算出根系长度。在玻璃壁上通常方格间距是5㎝×5㎝，但也可视根系密度或强度增大或威小。强度很高的根系甚至达到15㎝×15㎝的间距，而强度低的最好用小些的间距。使用这种直线截获法，不仅可以得到根长的信息，而且能很好的了解作物生长过程中根系的发育及其在土壤剖面中的分布。
根系强度和根系密度分别是单位面积和单位体积的根长。通常根系密度并不能从根系强度的数据计算出，因为根系在玻璃表面具有集中生长的浓度效应。可以从玻璃后取一定体积的土样，按一定的方法测出其中的根长，然后计算根系密度。如果观察窗用有机玻璃制成，且土壤为粘土，根系的密度可能会加大许多。粘土干燥时，在观察表面上会出现许多裂缝，根就会密集生长在这些裂缝中。如果在观察窗后，白根和深色土反差分明，就可以拍摄下来，并可用图像分析仪作记录，但这种情况并不普遍。因此，由有经验的工作者原地观察进行记录往往是最常用的方法。
用双目显微镜能够对根系和土壤原生物(fauna)进行详细观察，显微镜可以放在木架上或安在手推车上，这种推车要能在固定观察角度时上下左右自由移动。
用时差电影摄影机可以获得很有价值的有关根系发育、腐烂的数据。一架普通的电影摄影机经改装后可以在电马达的操作下，以一定的时间间距(由电钟控制)用16㎜的电影胶片进行拍摄，曝光时可用与快门同步的闪光灯。
3 根的光敏性 在玻璃后观察、记录、测量根系需要光源。然而记录过程中，光照对于根系生长的影响是值得引起重视的。不同作物对光照的敏感性不一致，比如Pearson的试验(1974)表明，短时间玻璃壁前的光照对玉米、棉花、大豆和西红柿等根系的生长几乎不产生影响，而对于花生的影响却是显著的，大大地降低了其根系的伸长速率。连续暴露于光照之下会妨碍果树根系生长，加速其木质化，影响侧根发育：若每天只暴露20min到2h之间，则能大大地减轻这种不良影响，而每周30min的曝光仅在初夏光照强度高时才产生影响。
总的来说，由于用这种方法得到的数据也是相对数据，在大多数情况下，短时间光照影响是可以忽略的。除了观察时间外，关闭所有窗口，也是防止藻类生长的必要手段，否则它们会大大影响观察的清晰度。
4根系研究室研究情况 根系研究室早期对多年生的木本植物根系研究较多，研究其根量的季节性变化，根的木栓化和腐烂过程，冠—根关系，根生长速率的昼夜变化，温度和水分对根系生长的影响等等。近年来，有关农作物的研究中逐渐开始利用根系研究室方法，着重于根系的分布，水分吸收，昼夜变化对根径的影响，以及不同的土类中根系的仲展分布等等，主要指示作物为玉米和棉花。
根际和根际的研究方法
一 根际的定义
根际(rhizosphere)是受植物根系生长的影响，在物理化学和生物学特性上不
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同于原土体的特殊土壤微区，是植物、土壤、微生物及其环境条件相互作用的场所，也是各种养分、水分、有益和有害物质及生物作用于根系或进入根系参与食物链物质循环的门户，是一个特殊的生态系统。根际的范围通常是指距离根表1-4㎜的土壤微区，但因植物种类和土壤的性质不同，根际范围变异很大。根际的变化是一个动态过程；它不仅存在于垂直根面指向土体的横向方向上，也存在于沿根轴的纵向方向上，并且根际动态过程在这两个方向上存在着时空变异。
自1904年德国微生物学家Hiltner提出“根际”的概念以来，随着研究手段的不断改进和人们认识的逐步深入，其内涵和外延已经得到了极大的丰富和发展。根际是植物、土壤和微生物及其环境相互作用的中心，是植物和土壤环境之间物质和能量交换员剧烈的区域，是各种养分和有害物质从无机环境进人生命系统参与食物链物质循环的必经通道和瓶颈。环境胁迫下的根际动态是植物对环境刺激内应的集中表现，植物根系释放的分泌物强烈地改变了根际的生物学和化学过程，不仅可以活化土镶养分、提高土壤养分资源的利用效率，而且还可以钝化根际中的有毒物质，使植物免遭毒害，减少对食物链的污染。由此可见，研究根际动态过程具有重要的理论和实践意义。正因为如此；有关根际动态的研究一直是国内外环境生物学、植物学、植物生理学、土壤学、微生物学、生态学、遗传学和分子生物学等学科联合研究的重要内容，也是国际研究的前沿领域。
为了纪念Hiltner提出“根际”概念100周年以及Hiltner对根际研究的巨大贡献，2004年9月在德国的慕尼黑召开了“Rhizosphere-2004”根际研究国际学术研讨会，大会认为经过近一个世纪的研究与实践，根际的研究已经深入到植物—土壤—微生物相互作用研究的各个领域，特别是在根际生态调控、根际管理、根际对话、根分泌物作用机制、根系分子生物学、微生物与病原菌的相互作用、根际研究方法等方面取得了重要进展。尽管如此，人类对根际相互作用过程的认识和理解仍然相当有限和不完整，未来根际研究的一个重要挑战是充分利用现代研究技术包括模拟模型和分子生物学技术，深入揭示根际过程及其相互作用的实质，利用根际动态过程的理论和知识定向管理、操纵和调控根际相互作用的过程，从而提高植物的营养状况、改善农产品品质、提高植物系统的健康水平和保护生态系统的生物多样性，通过根际生物的修复控制和减少环境污染，恢复脆弱生态系统的健康，实现农业和自然生态系统的可持续发展。因此，有关根际的研究正在受到国际多领域科学家越来越多的关注。 二 根际环境的研究概况
植物的根际环境主要涉及根际的物理、化学和生物环境，实际上三者并没有严格的区分，而是相互更加、共同作用，从而主宰根际动态过程的强度和方向。根际的物理环境指根际的微观结构、根际养分分布；根际的化学环境包括根际土壤的酸碱状况(pH)、氧化还原状况(Eh)、根际养分的有效性；根际的生物环境主要指根际微生物特点及根分泌物的作用等。
(一)根际的物理环境 人们通过电子显微镜观察证实，作物根与土壤之间有一粘液层，它是由根冠表皮细胞分泌的粘液、根际微生物分泌物、脱落细胞的降解产物等组成的。此粘液层的厚度可达10—50m，粘液层的外沿最先吸附土壤中的粘粒，以后再伸展到土壤孔隙中与土壤相混合。粘液与土壤混合层可以扩展到离根表l-4㎜。粘液层具有亲水性，土壤中的可溶性养分可以溶解于其内而被根系吸收。粘液层中含有大量有机物质，是微生物繁殖生存的天然培养介质。
根冠分泌的粘胶与根表的土壤或砂粒粘结在一起形成了特殊的根壳结构；由于根壳的存在，使根际结构产生了较大差异，根毛在很小的程度上对根壳的形成
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起作用，这些根壳通常被细菌和真菌定植。对于玉米而言，根在生长过程中皮层和表皮的脱落细胞会保持着较高的活性。根冠分泌的粘液、根壳结构和脱落的具有活性的根缘细胞对于植物的根系生长和植物生存具有重要的生态意义。
根际土壤中的养分分布是不均匀的。由于植物的吸收速率和土壤中各种养分移动性的大小不同，养分在根际出现亏缺或累积。以质流方式向根运输的养分，调节土壤的水分状况和养分浓度可以改变根际养分的亏缺或累积状况。对根际养分变化的研究表明，植物根系的吸水性能与土壤养分、水分和温度等环境条件有着密切的关系，同时又影响近根微区土壤中养分的迁移性和有效性。根际微区内养分的变化可以认为同时受到吸收和供应两方面的制约。因此，对根系的生长发育和养分吸收产生影响的各种因素，如根系的生理年龄；根密度；土镶水分、质地、缓冲能力和温度条件等都会明显地影响根际土壤中养分的亏缺范围?养分供应的强度和容量，迁移机理，植物的蒸腾强度等，并对养分的补给产生影响。如当土壤溶液中离子浓度和蒸腾强度较大时，养分的供应以质流为主，根际微区内有可能出现养分果积；反之，养分的迁移机制可能以扩散为主，容易在根际微区出现养分亏缺。
（二）根际的化学环境 土壤中植物所需的许多养分的有效性都受土壤的酸碱度(pH)和氧化还原状况(Eh)的影响。而根际土壤的pH和Eh环境与非根际土有很大区别。植物根系分泌质子是根际土壤酸化的直接原因。1983年马斯纳，1984、1986年刘芷宇等的研究表明，根际的酸碱性主要是由根系吸收阴阳离子不平衡所致，例如：当植物以NH4+—N为主要氯源时，由于阳离子的吸收占优势，力维持植物体内电荷平衡，根系溢泌出的H+多于 HCO3—或OH—，致使根际土壤呈酸性。反之，当植物以NO3——N为主要氯源时，根际土壤呈碱性。另外，根系呼吸以及根和根际微生物分泌物、植物种类、施肥等对根际土壤酸碱性也有重要影响。根际的Eh状况与非根际土也不同。对旱作来说，由于根际微生物活动的结果，根际土的Eh低于非根际土，这也能提高某些养分的有效性。由于水稻存在叶片向根的输氧组织，因而水田根际土Eh状况与旱田相反。另外，当植物N，P，K供应不足时，根际Eh也有下降的趋势。人们还发现，凡是耐瘠薄的作物品种，都有酸化根际的现象，这对作物在养分逆境条件下吸收P，Fe，Mn，Zn等难溶态养分是大有益处的。
根际pH值 根际土壤pH值与非根际土壤pH值差异很大。根际加值的改变主要是由与植物根系养分吸收相偶联的质子和有机酸的分泌作用引起。不同的氮竞形态(NIt4—N，N断—N)影陶根系明阳离子吸收的比值，因此，对植物根际微区pH值影响很大。但是；这种变化的情况因不同植物种类、根的不同部位的根际微区差异而异，这是因为不同根系或根部位酸或碱的释放速率不同，例如：禾谷类大多数作物，吸收阴离子大于阳离子，根际为碱性环境1蘸科植物，吸收阴、阳离子的比值几乎相等；根际呈中性；而养麦类和豆科植物，吸收阳离子大于阴离子，形成酸性的根际环境。因此，安排作物的耕作和混播时也需要考虑与根际pH值变化的关系。除了氮源对根际微区pH值产生影响，缺磷和缺铁也会诱发某些双子叶植物根系分泌质子。阴阳离子平衡的科学依据是无净电荷越过根土边界。根际的pH值变化产生许多后果，如影响对酿碱敏感元素的可镕性及植物的养分吸收，影响植物根系的生长，还可能通过对根际生物的影响间接影响植物营养状况，如利用根际酸化作用抑制小麦全蚀病病原菌，防止根病，促进根系的健康生长。
阴阳离子吸收不平衡是造成根际pH值改变的主要原因（Hedley，et al ，
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1982），而引起阴阳离子吸收不平衡的因素很多，包括氮肥的不同形态，豆科植物的共生固氮作用，植物的营养状况以及植物种类和品种的差异等。在施用铵态氮肥、根系吸收的氯素以铵态氯为主时，核物为了维持细胞正常生长的pH值和电荷平衡，根系分泌出质子，使根际以值下降；相反，在施用硝态氮肥、根系吸收硝态氮时，植物体内硝态氮还原过程中需要消耗质子，为了维持电荷平衡，根必须分组出OH—或HCO3—，因而使根际pH值升高。一些豆科植物通过根瘤进行固氮作用，将空气中的N2还原为刚好供植物吸收，从而导致根系分泌出质子，降低根际pH值；缺磷引起油菜(Grinsted，et a1，1982)和养麦(Romheld，1986)对阳离子的吸收量大于阴离子，于是，根际pH值降低x。缺锌抑制硝态氯的吸收，从而造成阳离子的吸收量大于阴离子，根际pH值也降低(张福锁，1991）。
影响根际pH值变化的另一主要因素是植物基因型间的差异。生长在有效养分较低的土壤上的某些植物，由于长期的生态适应过程使其逐步进化形成?些主动机制来改变根际环境，例如白羽扇豆在缺磷的石灰性土壤上，能形成大量的排根(cluster root)，并主动向根外分泌柠檬酸使根际环境酸化，柠檬酸又能整合土壤中的钙、铁、铝等(Dinkelaker，et a1，1989)，从而提高磷的有效性。这种植物自身引起的根际环境的改变对农业生产有极其重要的意义。例如在缺磷的麦田，混种白羽扁豆可以减轻甚至消除小麦的缺磷症状(Horst and Waschkies，1987)。缺铁也能诱导根系分泌质子。一些耐低铁的非禾本科单子叶植物和双子叶植物，在铁胁迫条件下，主动分泌某些还原性物质，根系在释放电子的同时也分泌质子以酸化根际环境。
根际pH值的改变，对环境中养分的有效性影响很大。这些影响既有有利的一面，也有不利的一面。在石灰性土壤上施用硝态氮肥由于降低了根际pH值，提高了P，K，Cu，Zn，Fe，Mn，B，Si等元素的生物有效性，不仅使植物对这些元素的吸收量增加，而且提高了植物对病虫害的抵御能力；而在酸性土壤上施用硝态氮肥，使根际pH值上升，也可以提高磷的有效性，减轻土壤酸度对根系的毒害作用。豆科植物在固氮过程中酸化了根际，进而提高了难溶性磷的利用效率，而缺磷的羽扇豆、油菜和养麦根际的酸化作用不仅提高了磷的有效性，而且明显增加了Cu，Zn，Fe，Mn的溶解度。施用铵态氮可以明显抑制全蚀病的漫延，但同时也抑制了菌根真菌的活性，降低了侵染率。根际酸度的增加可能导致H+代换根细胞中的部分Ca2+，引起原生质膜透性的增加，导致生物膜的完整性受到损伤，造成养分离子外渗或有害元素进入根细胞。在酸性土壤中施用铵态氮肥造成根际H+浓度增加，可能会抑制植物对某些阳离子(如Mg2+)的吸收，而在石灰性土壤中施用硝态氮肥造成植物根际OH—的增加则会抑制某些阴离子的吸收。在酸性土壤上根际pH值降低导致大量质子被动渗入细胞内，改变了细胞内pH值的稳定性，这些H+只有和羧基结合才能使pH值趋于稳定，过就需要大量的羧酸。当植物代谢受阻使羧酸的供应不足时，根细胞就会丧失对pH值的调节能力。
根际pH值也会影响根系的形态形成和生长速率，例如在酸性土壤上根际酸化作用可能会引起根尖和次生根变黑的受损症状，使根的伸长速率和根毛生长受到抑制，甚至造成整个根细胞死亡。但是，如果在生长介质中加入钙盐症状就可消除，所以，有的研究者认为这是由于H+代换了根细胞膜上的Ca2+所致。根引起的根际pH值变化在从根基部到根尖的根际中不均匀分布。缺磷羽扇豆的根际酸化作用主要分布在根尖和排根区，缺铁引起的质子分泌作用主要发生在根尖，而阴阳离子吸收不平衡则会引起整个根系表面的酸化作用。根据Romheld的研
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究结果（Romheld and Marschner，1984)，缺铁诱导每克新鲜根尖分泌的质子量为28mol，而施用NH4+—N却只能分泌3.6mol。这一分泌量足以引起根际pH值较大幅度的改变，提高根际土壤铁的溶解度，从而增加植物的吸铁量。在温度和湿度比较适宜、通气状况良好的酸性森林土壤中，土壤的硝化作用占主导地位，当土体pH值下降时，植物根尖部位根际pH值反而表现出上升的现象，从而减轻了质子和铝对根系的毒害作用，同时也提高了土壤养分的生物有效性。
2 根际氧化还原电位 由于土壤是一个高度不均一体系，所以，即使在通气良好的土壤中，也可能有一些嫌气的微区，其中的氧化还原电位明显低于其他土壤区域。在根际，这种微区出现的几率最多。虽然有关这些微区在植物营养方面的作用还不清楚，但根际微生物和根系呼吸作用消耗较多的氧气，可能会造成根际氧化还原电位下降；结果使一些变价营养元素(如Fe和Mn)得以活化，甚至造成毒害(如Mn)现象。同时，反硝化作用也有所增加。在双子叶和非禾本科单子叶植物的根际，由于缺铁导致根系的还原能力增加，位于皮层细胞原生质膜上的还原酶受到低pH值的强烈诱导，使铁的还原能力显著增加。这些植物对缺铁的适应性反应，如质子的分泌和还原配活性的增加主要表现在根尖部位。
根际酸化作用不仅增加了Fe3+的溶解度和移动性，同时也有利于它的还原和被吸收。另外，这种适应性反应也增加了根际铜和锰的还原，提高了缺铁植物体内这两种元素的含量。在铁和锰有效性较低的石灰性土壤上，上述植物缺铁的适应性反应对防止植物缺锰和提高锰的生物有效性具有重要的意义。在有效铁含量较低，而易还原锰含量较高的石灰性土壤上由于缺铁植物适应机理的效应，也可能会发生锰中毒的现象。
适于在嫌气环境中生长的植物种类(如水稻)，由于根经过通气组织从地上部向根输送O2，并由根释放到根际，可使根际氧化还原电位升高，这一方面可降低根际Fe2+，Mn2+的有害浓度，另一方面在氧化层会形成铁、锰氧化物沉淀。这些沉淀物能吸持养分离子(如Zn2+)，也有可能根据沉淀作用的强弱促进或抑制离子的吸收和运输。水稻根的氧化能力与根表铁氧化物的沉淀量成正比。在营养缺乏时，特别是在缺镁、缺钾和缺磷时，根系分泌低分子有机物的数量和根际微生物的活性都显著增加，并因对O2+的消耗量剧增，而可能引起水稻根际铁的毒害作用。 （三）根际的生物环境 根际的生物环境主要指根系生长状况和根际的微生物。根释放分泌物是根系最重要的特性之一。根分泌物为微生物提供了能源和碳源，是根际效应得以维持。此外，根分泌物还可以通过改善根际养分环境提高养分的生物有效性。
二 根际的研究方法
根际研究的进展依赖于研究方法和研究技术的不断进步与创新。根际研究方法汲取了植物学微生物学、植物生物化学、分析化学、一起分析以及分子生物学研究方法的精华，并在实践中不断改进和完善，形成了一整套的根际研究方法。近年来随着技术条件的改进，乳电子显微镜、同位素示踪、电子探针、有机物分离鉴定技术、微电极法、冰冻切片法、放射性自显影法、原位显色技术在根际微区研究上的应用，以及根际养分动态的数学模拟等，使这一领域的研究内容逐步深入，范围也逐步扩大。
（一）根际结构的显微研究方法
1. 徒手切片-普通显微镜观察法
（1）取样 将根系从土壤中仔细地挖出，把根与附着在上面的土壤一起放
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在塑料袋中带回实验室，地上部可以剪掉或者保留。在取样的过程中要防止根的过分干燥，如果天气热，塑料袋要放在装有冰块的容器里。
（2）切片 较粗的根系可以直接在手中切片；小的根系要放在石蜡的沟槽里，或放在用胡萝卜根制成的垫片上。切片的过程中，要保持样品的湿润。为保持刀片的锋利，需要经常更换刀片。
（3）染色 在染色以前，首先要认真的观察材料，通常会发现材料的一些重要细节，如果不用染色即可获得很好的观察效果，可以省去染色步骤，这样可以可以看到材料组分本身的颜色，如果效果不好，就需要进行染色。
2．超微切片—电子显微镜观察法 用电子显微镜可以观察根—土界面上更细微的变化，具体方法请参阅其他有关电子显微镜使用和切片准备的专业书籍，这里不再详述。
(二)根际模拟研究方法与根际土壤样品的采集
1．抖土法 根-土界面的区分和根际土境样品的采集难度是相当大的。在根际研究上研究者通常采取剥落与根系粘着程度不同的根面土、根际土和非根际土进行化学分析的方法。根面土为距根面0-2㎜，紧密粘附于根面的土壤；根际土是距根面l-4㎜，松散粘附于根面的土壤；距根4㎜以上，手工很容易抖落下来的土壤，即为非根际土，可作为原土体的土壤。事实上，植物生长影响的根际范围依赖于植物和土壤的种类，因此，上述根际范围的划分也因植物和土壤种类的不同而异。
抖土法的操作要点：植物生长到一定的时期后，从土壤中小心取出，置于一块干净的塑料布上，用手轻轻抖动，除去容易抖落下来的土壤，这部分即为土体土壤。然后将带土的根移至另一块干净的塑料布上抖动多次，分离出松散附着于根表面的土壤，这部分可作为距根l-4㎜的根际土。仍然粘附于根表的即为紧密附着的根面土，距根0-2㎜，一般不易从根表面分离出来，可采用一定体积的去离子水浸泡的方法把附于根表的土壤洗脱下来，测定溶液中特定组分的含量，然后换算为单位根际土重量所含组分的浓度。所采集的距根表不同距离的土壤样品可用于不同的研究目的。
采用抖土法能够研究根际微域内存在的有效养分富集成亏缺状况。抖土法简单易行，不需要特殊的工具，适用于田间或盆裁试验根际土的取样，能够反映自然条件下根际的真实情况。这种方法最早由Starkey(1931)提出，用来测定根际土的pH值(Riley和Barber，1971)和矿质元素的浓度(Sihna and Singh，1976)。该方法的主要缺点是取样的精度较低，试验方法较为粗放，并且因为距离根铀最近、粘着最紧的根面土剥离十分困难，在浸提中一般是连同根系一起浸提，有可能造成根系中的离子在浸提中外溢，使所得结果产生误差。而且，这种试验方法在粘质土壤中很难应用，因为手工抖落不同程度粘附于根表的粘性土壤技术上很难达到要求。因此，这种方法只能是定性和半定量地测定根际的动态变化；然而对于根际效应影响范围较大的、生长在沙性土壤上的植物，抖土法的应用效果比较好。
2 根际环境的模拟培育和根际土壤的切片技术 植物根的呼吸、吸收和分泌等活动引起根际pH值、Eh、O2、水分与土壤养分等环境条件的变化，这些根际过程又影响看根际土壤中养分的迁移和有效性。根际微区养分的富集或亏缺是客观存在的，反映了根-土养分供求间的关系和环境条件的影响。因此，研究根际动态必须采用高精度的根际取样方法。 根际土壤精确取样的难度在于根际微域范围狭窄，细根和根毛与土壤很难分离。为了解决这些问题，科学家采用特
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殊装置培养植物，将根与土壤完全分开，创造模拟根际，从而很方便地切取距根表不同距离的根际土壤。根际土壤的切片可以采取常规鲜样切片或冰冻切片方法，主要取决于研究的目的。
根际环境的模拟培育方法主要有集束根-土块接触法、根袋法、根垫法、根箱模拟方法等。
(1)集束根—土块接触法 集束根-土块接触法由Farr及其合作者于20世纪60年代末建立。这是一种根际微环境的模拟研究手段，其基本原理是利用一种允许养分和水分自由通过而植物根系不能穿过的隔膜使根系和土壤之间分离开来，分别逐层切取土壤薄片进行分析，借此了解距根表面不同距离处土壤的物理化学性状。
该法首先要进行集束平面根的培育，一般地可采用有机玻璃的漏斗形框架(4㎝×13㎝×0.3㎝)，在漏斗口上放入尼龙网，密集地播种30颗露白的种子(禾谷类植物，如水稻)，连同漏斗框架放人溶液中培育(图6—28)。根系通过漏斗颈向下生长，1个月后形成定形的集束平面根。
其次，要进行土块的制备。将供试土样磨碎后过100目筛。称取一定量土样装入规格本2㎝×4㎝×4cm的长方形有机玻璃盒内。盒的两头开口，以便连接根系和外界。将制备好的两块土块在某一根段处对称地紧贴于平面根两侧(根—土界面为2㎝×4㎝)，中间隔一层能让养分和水分自由通过，而根系无法穿透的隔膜(可用尼龙网或孔径为1.2m的混合纤维素脂膜)。然后放入盆钵中，装进石英砂或土壤，在温室内培育。
当植株在盆钵中生长一段时间后(一般少于20天)，取出有机玻璃盒和土块，随即置于液氮中速冻。将土块在切片机上切成1㎜厚的薄片供化学切试。如带结合同位素方法进行研究，如15N示踪法，则需按试验要求先准备好标记土、制备土块，再按前述步骤操作，最后测定15N的丰度。
(2)三室根箱系统(改进的集束平面根法) 根箱系统分为三室，中室种植物，将萌芽的种子直接种人土壤中。两个侧室装测试土壤，室与室之间用300目的尼龙网隔开，用纤维绳给中室植株供水，通过调节水面高度来调节供水强度，使纤维绳的吸水速率与植物蒸脚和土壤蒸发速率相一致。该装置用纤维绳连续供水减轻了水流对土壤结构的破坏和养分迁移的干扰，同时直接播种又避免了对植物根系的损伤。取样时将三室小心分开，揭去尼龙网，从侧室切取距根面不同距离的薄层土样。
(3) 根袋法 用25m孔径的尼龙网缝制成根袋，内装过筛并混有肥料的土壤，将萌芽的种子播入根袋土中，再将根袋放人一个中号盆钵中，盆钵中的土壤与根袋中的土壤完全相同。当植物生长到一定阶段后，取根袋中的土为根际上，距根袋25㎜以外的土壤为非根际土，将土壤样品晾干，供分析之用。分析前应将土壤中的根捡出，可先用绸子摩察有机玻璃棒，使之带电后，从干土上轻轻扫过，吸去细根。
该方法人为因素影响较大，易受根污染。
(4)根垫法 为了解决根对根际土样的污染问题，可以利用隔膜将报与根际土上下隔开，这就是根垫法。根垫法由Kuchenbuch和Jungk创立，试验装置由上下面层塑料筒组成，上层种植物，中间是尼龙网(孔径小于30m)，下层为根际土。为了使土壤容易取出，将塑料筒沿纵轴切开一条切口。将塑料筒放置在陶瓷多孔板上，陶瓷板经一条塑料管与营养液或去离子水相连，用来为系统补充水分。植株密度应足够大，完全覆盖尼龙网底面。收获后，将带有尼龙网的下部
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容器故于液氯中冰冻，再用切片机切成薄片，以供测定。
该装置存在一定的缺陷：由于土壤体积较小，缺乏缓冲性，当蒸腾作用强烈时，植物易萎蔫。
Gahoonia和Nielsen(1992)采用改进的根垫法培养装置。研究了控制条件下植物的根际动态。利用该装置可准确获取距根表不同距离的根际土。首先植物在装置(a)的PVC管子中预培养10天。管子的底部用细尼龙筛网封住，防止土壤污染根系。通过两个黑色PVC膜包裹的吸水纤维绳供应营养液，当根垫形成时(大约生长9天)，移去纽尼龙筛网，将预培养形成的根垫转移到测试土柱上(装置(b))，新的土柱的上湖53m的尼龙筛网封住，以防止根系进人士住，根垫在l㎝的土层中快速生长，在53m的尼龙筛网上形成新的根垫。为了保证—定郎土壤含水量，土柱被放置在含水的沙层上，沙层通过吸水纤维绳与供水装置相连。采集根际土壤时，将土柱从根垫下取出，在液氯中冷冻，用切片机切取距根表不同距离的根际土样品。
(5)根箱模拟根际方法 利用根箱模拟方法不仅可以直接观察和记录根系的生长参数，而且还可以通过直观的显色反应研究根际生物学和化学过程的变化，如根分泌物的释放、pH和Eh的变化等。根箱模拟方法可以严格控制试验的处理，模拟自然土壤中根系的生长情况，因而能比较真实地反映根际的动态过程。根箱模拟装置的种类较多，除了采集根际土的三室根箱装置，这里重点介绍用来观察根系生长、进行根际测定或显色过程的根箱模拟方法；植物种植在装有土壤的根箱中，根箱的大小依植物的大小来确定，为了使根系沿透明有机玻璃板生长，根箱的厚度应控制在l-2㎝的范围，并且使根箱的有机玻璃板面朝下，根箱与水平方向成45°夹角，根系由于重力的作用将沿着透明有机玻璃板的板面生长。在植物生长过程中，应用不透明的黑纸遮住透明有机玻璃板，保证根系在黑暗中生长。观察根系时，取下黑纸，用透明胶片和彩色记录笔描绘出根系的生长轨迹，通过扫描软件计算根系的生长速率和总长度。如果需要对根际的pH值、Eh或其他反应进行显色，首先制备琼脂板，然后打开根箱前面的透明有机玻璃板，使根系暴露在外(为了保证根系不失水，可用微型喷雾器在根表喷洒少量的雾滴)，把预先推备好的含有指示剂或其他染料的琼脂板轻轻地平铺在根系的表面，用塑料布覆盖整个装置以保持水分，减少水分蒸发对显色反应的影响，培养一定的时间后，琼脂板在根系生理反应的作用下就会显色，可以直观观察根际动态的变化（如根际pH值、Eh变化），也可以对颜色进行数字化处理和分析，定量描述根际过程或根分泌物释放的速率。 （三）菌根际研究方法
1．根箱培养系统
（1）三室根箱培养系统 中国农业大学的李晓林教授在研究菌根际的作用范围时，设计了三室根箱培养系统。植物种植在中室中，受菌根侵染的根系在中室中大量生长，根系不能穿过中室两侧的尼龙网膜(孔径30m)，而菌丝可以穿过尼龙网膜进入外室生长。李晓林采用这种方法证明了丛枝菌根真菌菌丝可穿过根际区，生长到根外12㎝远的区域，将根系自身吸收土壤磷的范围增大了60倍，这是菌根促进植物吸收和利用土壤磷的重要机理。
(2)五室根箱培养系统 为了准确研究菌丝际养分的动态，在三室根上，建立了五室根箱培养系统(Li，et a1，1991)，与集束平面根法一样，通过五室根箱培养系统创造出集束菌丝平面，测定距菌丝平面不同距离的养分消长情况，以探讨菌丝际养分的动态。与三室根箱培养系统类似，受菌根侵染的根系在中室中大量
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生长，菌丝可以穿过尼龙网膜进入外室生长，形成菌丝室，而根系不能穿过中室两侧的尼龙网膜(孔径30m)。在菌丝室与员外层的土壤室之间隔有一层更细的网膜，菌丝不能通过，这样在0.4m网膜的表面形成了菌丝集束面；可以用这样的方法精细研究菌根际养分的动态。
2．玻璃珠培养方法 研究菌丝最大的困难是难以获得大量的纯净菌丝，中国农业大学李晓林的菌根研究小组建立了以玻璃珠为介质的AM真菌培养方法，克服了以往难以获得足量干净苗根真菌材料的技术障碍，使菌丝的化学成分定量研究成为可能(Chen，et a1，2001)。试验的装置，受菌根侵染的植物根系生长在盛有土壤的外室中，根系不能穿过两侧的尼龙网(孔径30m)，而菌丝可以穿过尼龙网进入缓冲室—河沙室，随着菌丝的继续生长，菌丝进入盛有玻璃珠的中室，并大量生长，植物培养一定时间之后，收获玻璃珠室中的纯净菌丝，记录菌丝的重量，并分析菌丝的化学成分。玻璃珠培养方法为菌丝的生物学研究特别是菌丝解剖、分子生物学和吸收养分的生理机制等基础研究提供了重要的菌丝采样技术，这种方法已被国际上广泛采用。
(四)根际原位研究—显色方法 根际非破坏性原位研究技术正在得到广泛应用，最典型的例子是根际的原位显色技术。利用这种技术能够准确并直观地确定根分泌物释放的部位或根际反应的部位。目前，多种显色技术已经在根际化学变化的检测中得到了应用。显色试验技术一般包括湿色剂和载体两大部分，显色剂是指pH、Eh指示剂或酶反应底物，载体常为琼脂板、聚丙烯酰胺膜、滤纸或层析纸。把含有显色剂的载体平板或膜放在液培或土培植物的根系表面，这种方法是定性或半定量的测定技术，在某些情况下，也可以完全定量评价根际化学过程的变化。
1 根际Eh的原位显色
(1)根际三价铁的还原 基本原理是BPDS（红菲罗啉）可以与Fe2+形成红色复合物。将 Fe(Ⅲ)EDTA(100mol/L)和BPDS（300mol/L）溶于7.5g/L的琼脂溶液中（Marschner，et al，1982），将含有Fe3+和BPDS的琼脂板放在根系的表面，或者把植物的根系浸入此溶液中，培养一段时间后，Fe3+的还原会导致红色复合物F2+-BPDS的形成，显色过程为30min至数小时。
(2)根际锰的还原 基本原理是把KMnO4加入7.5g/L琼脂溶液中，形成1mmol/L KMnO4 溶液，在50℃下培养2h，诱导MnO2的形成，然后将琼脂片放在根系表面，MnO2的还原会导致棕色的琼脂片褪色，显色时间一般为一天至数天。
2 根分泌物络合铝的原位显色 基本原理是Aluminon与Al3+形成红色复合物。将含有Al-Aluminon的琼脂片放在跟表面上，根分泌物中的有机络合物与Al-Aluminon竞争Al3+导致琼脂的褪色。
3根际酸性磷酸酶的显色 基本原理是酸性磷酸酶可以水解底物1-naphtyl phosphate，形成的产物1-naphtol与染色试剂Fast Red TR（diazotized 2-amino-5-chloro-toluene-1，5-naphtalene disulfonate）反应形成红色的复合物。
4根际磷活化的显色 基本原理是用含有磷酸钙的琼脂溶液作为植物生长的介质，植物活化和吸收磷酸钙以后，磷酸钙吸收区变为透明的区域，指示出植物根系活化和吸收的部位。 （五）示踪技术在根际中的应用 放射性自显影法是一种光化学过程。用作示踪的放射性核素所产生的射线使乳胶感光形成潜影，经显影、定影处理，就可将
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已形成潜影的银离子迅速还原为黑色的银颗粒，而溶去未形成潜影的银离子，出现图像。
放射性自显影法具有的最大特点，主要是能定位放射性示踪剂在样品中的准确分布，生动、直观，比起基于电离和闪烁作用的放射性探测只能测定整个样品进入探测器灵敏区的总放射性有很大的优越性。随着核子乳胶、组织制片及观察技术的发展，该项技术逐渐从宏观自显影，发展到能精确定位微观区域中的放射性物质的存在与分布。放射性自显影的探测效率较高，可累积地记录人射的放射性，在植物生长过程中可以反复地“自象”，借此观察养分随时间的变化过程。此外，这种方法操作方便，设备简单，研究资料便于长久保存。它的局限性是：定量上误差较大，只能作相对定量，只能得到一个总量的概念，对养分的状况无法区分；测定速度低，在微弱的放射性条件下需要很长的曝光时间等。这使该技术在应用上受到一定的限制。
一般微观放射性自显影方法 根际微区属于微观研究范畴，这里简单介绍微观放射性自显影方法。
1 微观自显影方法的特点是需要把试验材料制成切片，感光材料是专用的核子乳胶，获得的放射性自显影在光学显微镜或电镜下进行显微观察，即能显示出放射性示踪剂在微域范围内的分布。此法具有较高的分辨力，其操作程序一般是：用放射性示踪剂标记试验材料，制备切片，施行乳胶，干燥，曝光，化学加工（显影、定影、水洗)，显微观察等。
这种微观自显影一般适用于生物体，试验样品制成组织切片、细跑涂片或薄切片，要求较高。乳胶层也要很薄，所以一般多用液体核子乳胶、较薄的乳胶干板或温底乳胶。在根际研究中可以借助平面根培养法进行微观自显影。平面根培养法是研究根际养分耗竭，根系吸收特性的手段。这种方法需要特制的，形似竖立的扁平的培养盒(箱)培养植株；这种培养盆一般用有机玻璃板制成，其大小根据试验的需要确定，如有效体积为20㎝×20㎝×1㎝可装土600g左右。在内培养室外再加上外室，分为内外两层，外室作为防护层。外室除一面是有机玻璃板(3㎜)制成的观察面外，其他各面均采用聚氯乙烯硬质塑料板，用塑料粘胶贴合在一起。内室的直径比外室的直径略小；有机玻璃板的顶端带有提环，便于内室与外室密合而又能方便地插入和抽出。把用放射性示踪物标记过土壤充填到内室中，栽种上作物，即可以在一定生育期做纵向或宏观的放射性自显影，还可以对根际区的根系和土壤进行联合冰冻切片，对根际标记养分的耗竭状况进行微观自显影观察。
微观自显影的几个基本方法是接触法、湿贴法、湿贴—接触法、液体乳胶法等。其中以接触法最为简便，即将乳胶干板或X光胶片的乳胶面面对切片，紧密接触，曝光后，进行化学处理，获得自显影片。它的缺点是分辨率低，不能作高倍镜观察。液体乳胶法是目前应用较为广泛，效果较好的方法—用滴加涂布法或浸膜法将液体乳胶直接加在载玻片的组织切片上，使之均匀铺开，晾干后连同标本一起进行曝光、显影、定影等，即可获得自显影片。
2 薄层标记的自显影法 在国内目前还没有低能放射性核素生产的情况下，改善自显影技术的一个途径是采用“薄层法”制备标本，以提高自显影的分辨率和清晰度。“薄层法”的具体做法是：根据作物根系的大小，试验时间的长短，制作与前述平面根培养法类似的培养箱，扁平直立。用于苗期生长规格可为20㎝×5.5㎝×1㎝或34㎝×9cm×1㎝，没有外室，盒的正面为能移动的有机玻璃板，其余各面可用不透明塑料板制作，狭窄底面每隔4cm设一进水孔。
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标记土的制备方法是，分别称取通过80目的土壤42g或12g(大、小生长盒)，按1：1的土水比调成泥浆。按照试验目的和要求加入示踪物质。浸泡24h，充分搅拌平衡，烘干，磨细，过100目筛，作薄层涂片用。
育苗时在大、小生长盒底层垫上滤纸，分别加入通过40目的含有与标记土相同肥料的干土120g或40g，压实，使容重在1.3g/mL左右。加入20%干土重的水分，平衡后用玻璃板压平土面。
作簿层涂片时，在底土平面上均匀加入5％干土量的水分(可用注射器加入，或用滤纸浸润)，稍平衡后，用软性底纹笔将标记土均匀涂布于其上(厚度l-1.2㎜)。
做放射性自显影时，在暗室条件下将X光片放置于标本的有机玻璃板尼龙薄膜上，曝光，并经过化学处理，取得“自象”。
（六)根际的微电极研究方法 即把特制的微电极插入土壤的各个部位，以测定这些部位的pH、Eh、电导和养分等的方法。土壤本身具有不均一性，生长在土壤中的植物，在受土壤影响的同时，其生长也引起土壤性质的一系列变化，尤其是近根土壤与土体间的化学性质的差异。由于微区的研究要求测定范围小，分辨率高，也要求有一定的精确性，尤其是养分状况要求保持原位，因此，根际测定的精度在很大程度上取决于测定技术。早在1938年，就有人利用微电极研究土壤微区的pH状况。接着有许多报道是在根际微区的氧化还原状况方面的微电极应用。近年来，微电极在土壤性质、植物营养及土壤—植物相互关系的研究中得到了越来越广泛的利用。例如，于天仁等用其研究土壤的氧化还原电位、pH值、铵态氮等的微域变化规律，许曼丽等用锥形微钾玻璃电极测定根区土壤钾素状况等。此外，还有对植物细脑膜电位的测定报道。
微电极一般指敏感尖端直径以微米计的微型电化学传感器。直径＜0.5m者为超微电极，最小的微电极尖端直径仅为0.04m。微电极法在原理上与通常的大电极法并没有差异，只是由于电极很小，所以在电极制造和测定技术方面存在着一些特殊问题，如有些操作应在放大镜下进行等。这种方法的优点是：它可以原位地连续测定根际微区的养分环境状况；减少由取样、提取等分析步骤带来的误差；微电极法分析仪器结构简单；操作方便，易实现自动化；测定的是离子活度的函数而不是浓度，能代表扩散层中的离子数量以及对植物直接有效的离子数量，更能说明问题；由于微电极的敏感尖端可以做得很细微，可以直接插入活体甚至细胞内检测等。因此，在根—土界面这样的微域研究中微电极应用是很有发展前途的。当然，微电极在原位测定上还存在不少问题，特别是应用到土壤这样一个复杂的体系，干扰因素较多；更容易在测定时出现这样那样的问题，因而在所测定的结果的解释上需要很慎重。
由于篇幅有娘，这里仅就常用的微铂电极、微甘汞电极、微钾玻璃电极和微锑玻璃电极做简单介绍。
1 微铂电极 微铂电被属于金屑基电极中的零类电极，即惰性金属电极。这类电极包括金屈惰性金属电极或碳电极：；它们浸在含有能发生氧化还原反应的氧化态和还原态物质的均匀溶液中，即构成氧化还原电极。
微铂电极在制作技术上的关键问题，是获得微小的尖端和优良的绝缘。绝缘方法有两种：绝缘物覆盖法和玻璃封合法。
2 微甘汞电极 微甘汞电极是配合微铂电极或微银—氯化银电极作为参比电极用的。微甘汞电极是电化学测量中最常用的参比电极，是一种对氯离子响应的第二类电极，由汞、氮化亚汞(甘汞)和氯化钾溶液组成，可表示为
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Hg/HgCl2/Cl-。
微甘汞电极的上部是专门定制的一支小甘汞电极芯，即将少量由汞、甘汞和少量氯化钾溶液共同研磨成的灰色糊状物置于纯汞表面，其上再加入饱和氯化钾溶液而成。下端是有机玻璃制成的针管盐桥，管身部分的内径约为0.4㎜，外径约为0.7㎝，顶端尖细，内充以含饱和氯化钾3％的琼脂。针管加工和装配要求精细，是制作的关键。
3 微钾玻璃电极 土壤中离子活度的研究进展，是与其测定技术的改进有密切联系的。近年来，离子选择性电极迅速地发展和广泛地应用于土壤研究中。离子选择性电极是一种可以用电位法有选择地测定溶液中某一特定离子活度的指示电极，其中具有特殊地位的是玻璃电极。玻璃电极的功能及许多其他重要性能，包括电阻、化学稳定性、软点、热膨胀系数、加工性能以及是否易于反玻璃化等，取决于制造玻璃电极敏感膜的玻璃组成。
制作微钾玻璃电极：首先要选择某种钾敏感玻璃的组成和配方，按比例称取一定数量的分析纯试剂，研细混匀，然后置铂坩埚中加热成熔融玻璃。在制作直径小于l㎜的微钾锥形电极时，可在直径为2㎜的玻璃管一端粘接一小块烧熔的钾敏感玻璃，然后，在火焰上拉成锥形薄膜。制作中需要避免敏感料与支杆料混熔，造成电极的功能不良或完全丧失。
4 微锑玻璃电极 在研究中，微锑电极可以沿根系原位测定pH变化以及氮素和钾营养对根际pH变化的影响。
制作微锑电极：加热锑粉到熔点(650℃)。这个过程会受到氧的干扰，因此，应在氮气的条件下进行或者加热两次。锑粉熔化后，让探针冷却(这个过程受氧的影响不大)。用真空泵将锑粉吸入玻璃毛细管(内径为0.8㎜)中。然后，把毛细管切成2㎝的小段。把锑的小段从毛细管中取出。在320℃时，用电焊锡将一根金属丝与锑段焊接起来。最后，用巴斯德吸液管固定金属丝与锑段的焊接。 (七)电子探针法 自20世纪60年代发展起来的电子探针显微分析技术，是利用电子束和物质作用产生特征X射线来进行分析的，是一种新型的电子显微分析技术。20世纪70年代以来，其应用范围逐步扩展到土壤—植物研究领域。在土壤—根系界面研究方面，它不仅能提供微区表面形貌的显微特征，而且能同步显现出养分分布状况。电子探针法测定的灵敏度很高，其分辨率以纳米计算，元素的绝对检出限量为10-15-10-18，不破坏样品，用于淮确的定位测定极为理想。电子探针法可以同时测定从硼到铀的所有元素，分析面较广，有利于研究元素的相互关系。因此，较之放射性自显影和微电极技术，应用上局限于少数养分元素、区分的界限较粗以及受环境的影响较大等因素，具有特殊的优越性。电子探针法除了可以分析某一点的成分外，还可以分析某元素的线分布和面分布，是研究养分的吸收和转运机制的有效技术手段。早在70年代初就有人报道，应用33P示踪和电子探针技术相结合的方法研究NH4+对根表面磷淀积的影响，提出了NH4+对根表面磷溶解的促进作用。用此方法可研究水稻土—根界面上的元素分布，鉴别出根毛上粘附着的大量颗粒分泌物；观察到不同年龄的根表面存在的磷形态的不同及植物组织和细胞内部的元素超微分布情况；根据硅在成熟根的内皮层聚集的现象，证实了“内根际”存在；提出了区分根—粘液—土壤界面的参考指标等等。
但是，电子探针法也并非完全符合理想，其本身还处在不断的发展和完善之中。在土壤和植物研究的应用中还存在一些有待解决的问题，例如：植物根系含水量较高，以及根与土壤性质上的差异造成样品制备上的特殊困难，导致误差的
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产生；在土壤定量的标准样品问题上，单纯的标准晶体只能作为参比，所测得的结果在换算成具体含量时仅仅是相对值；对元素C、N和O等的分析，目前还不能检测；检出极限量尚不够低，得到的结果只能用于定性或半定量等。因此，需要进一步改进样品制备技术和测试技术，使其应用范围更为广泛。
1电子和物质的相互作用 当高速电子束轰击试样表面的微小区域时，其入射电子在试样内部穿透和散射，和物质发生相互作用，作用的结果能够产生二次电子、特征X射线。二次电子是电子束逐出核外电子产生的，能量比较低，一般在50eV以下，激发区域来自样品表面10nml范围内。在电子束能量一定的情况下，二次电子的激发效率和样品元素的电离电位有关，同时，也与电子束和样品表面的夹角有关。
试样内原子的内层电子被轰击出原子系统后，外层电子跃迁到内层空位，同时释放出特征X射线。这种X射线的能量等于两个能级能量之差，因而具有元素特征。不同元素所产生的特征X射线能量(或波长)不同，根据产生的特征X射线的能量(或波长)和强度，可以进行元素成分分析。
高能电子束轰击试样后，还产生背散射电子、俄歇电子、阴极荧光和样品吸收电流等许多信号，可以分别反映出试样的某些物理化学性质。 2 电子探针分析仪 电子探针通常和扫描电镜合为一个仪器。这种仪器的主要组成部分包括电子枪、电子透镜、样品室、信号检测系统、显示系统以及真空系统。要作用是将打到样品表面的电子束缩小，并且可以使之在50-30m范围内变化。电子透镜包括会聚镜和物镜。近电子枪的是会聚镜，其主要用途是调节打到样品上的入射电子束的强度；近样品的是物镜，主要用来调节打在样品上的束斑的大小。电子束的强度变化可以影响图像的亮度和反差，束斑的大小则影响图像的分辨率。样品室内有样品台放置样品，样品可以在不同方向运动。X射线光谱仪装在样品室内。信号检测系统对电子束在样品上激发出来的信号(主要是对二次电子和X射线)进行检测。通过显示系统，最终得到表征样品形貌和化学成分的电子图像以及X射线能谱。仪器的真空系统保证电子枪、电子透镜和样品都处于真空中。
3．二次电子的检测 被激发后向各个方向发射的二次电子，由于受收集极正电场的作用被拉向收集极。经加速极加速后使闪烁体发光，变电信号为光信号，再经光导管和光电倍增管变成电信号输出。
二次电子的发射量主要取决于样品表面的起伏状况。当电子束在样品表面扫描时，由于样品表面起伏状况不同，电子束与样品夹角不同，因此所产生的二次电子信号也不同，从而引起显示屏幕电子图像的反差，据此可以了解试样表面凹凸不平的状况，进行样品表面形貌的观察。
4．特征X射线检测 电子探针分析中，样品中的不同元素受具有一定能量的电子束激发发射出特征X射线，通过检测特征X射线波长或能量即可确定样品中所含元素，检测特征X射线强度即可确定元素含量。通常测定特征X射线波谱的方法叫做波长色散法(WDX)，测定特征X射线能谱的方法叫能量色散法(EDX)。波长色散法是利用分光晶体对不同波长的X射线的衍射作用，将不同波长的X射线分开并检测的一种分折特征X射线的方法。该法的优点是波长分辨率高，缺点是X射线利用率低，不适于在低束流和弱X射线的情况下使用，因而不能在观察二次电子象时同时进行元素分析。能量色散法是利用X射线能量不同进行分析，检测特征X射线的方法。这种检测法可以得到X射线能谱，即X射线能量和强度关系分布图。通过X射线能谱，可以进行定性和定量分析。
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与波长色散法比较，能量色散法分析速度快，检测效率高，在几秒或几十秒内就可显示出某点全部元素的存在状况，并可以在观察电子图像的同时进行成分分析。
定量分析方法有标准试祥法、比较标准试样法和非标准试样法。标准试样法利用标准样品绘制标准曲线，是最精确的方法，但该法要求标准样品与待测样品主成分相同，对于每种试样都要配制一套相应的标准样品，工作量很大。非标准试样法就是利用计算机对影响特征X射线强度的各种因素进行校正，以求得元素含量的定量分析方法。
由于入射电子束可以在样品上扫描，因此，根据不同目的可采用不同的分析方法，包括点分析、线分析和面分析。此外，利用电子探针对样品成分做定量分析时，电子束的加速电压必须大于激发特征X射线的临界激发电压，但不宜过高，因为电子束流的增加会在提高特征X射线激发量的同时，增加样品损伤以及导致样品的分辨率下降。一般的电子束流调节至10-10—10-6范围内。
参考文献： 毛达如. 《植物营养研究法.》北京农业大学出版社.1994 思考题：1. 名词解释：根际，根系
根际：根际是受植物根系生长的影响，在物理化学和生物学特性上不同于原土体的特殊土壤微区，是植物、土壤、微生物及其环境条件相互作用的场所，也是各种养分、水分、有益和有害物质及生物作用于根系或进入根系参与食物链物质循环的门户，是一个特殊的生态系统。
根系：根系是作为固定植物体，摄取、运输和贮存营养物质，以及合成一系列有机化合物（从主要的贮藏产物和可溶性代谢物到生长调节物质）的器官，是植物的地下生长部分。
根际是一个特殊的生态系统，而根系是植物地下部分生长的器官。 2.根际的研究方法以及他们的优缺点？ （一）根际结构的显微研究方法：
1.徒手切片-普通显微镜观察法 2. 超微切片—电子显微镜观察法 (二)根际模拟研究方法
1.斗土法：采用抖土法能够研究根际微域内存在的有效养分富集成亏缺状况。抖土法简单易行，不需要特殊的工具，适用于田间或盆裁试验根际土的取样，能够反映自然条件下根际的真实情况。这种方法最早由Starkey(1931)提出，用来测定根际土的pH值和矿质元素的浓度。该方法的主要缺点是取样的精度较低，试验方法较为粗放，并且因为距离根铀最近、粘着最紧的根面土剥离十分困难，在浸提中一般是连同根系一起浸提，有可能造成根系中的离子在浸提中外溢，使所得结果产生误差。而且，这种试验方法在粘质土壤中很难应用，因为手工抖落不同程度粘附于根表的粘性土壤技术上很难达到要求。因此，这种方法只能是定性和半定量地测定根际的动态变化；然而对于根际效应影响范围较大的、生长在沙性土壤上的植物，抖土法的应用效果比较好。
2. 根际环境的模拟培育方法主要有集束根-土块接触法、根袋法、根垫法、根箱模拟方法等。 （三）菌根际研究方法
1．根箱培养系统
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（1）三室根箱培养系统 (2)五室根箱培养系统 2．玻璃珠培养方法
(四)根际原位研究—显色方法 1 根际Eh的原位显色
2 根分泌物络合铝的原位显色 3根际酸性磷酸酶的显色 4根际磷活化的显色
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